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梯度洗脫在反相色譜中的作用(下篇)

更新時間:2022-12-23 點擊次數:1288

梯度洗脫可用于處理不能以等度洗脫分離的樣品,而最常見的使用梯度的因素是多成分保留能力不同,無法在等度洗脫中全洗脫出來,或以等度方式無法達到滿意的分離效果。總結下來,以下幾種情況,可以采用梯度洗脫:

1、多組分樣品的極性范圍大,用等度無法全部洗脫的樣品;

2、大分子樣品;

3、改善峰峰型;

4、目標峰出峰后,短時間內提高有機相比例,洗脫強保留干擾雜質;

5、用等度洗脫無法達到分離的情況。


#01

目標峰出峰后,短時間內提高

有機相比例,洗脫強保留干擾雜質

在檢測復雜成分的樣品時,往往存在些強保留物質,采用等度,無法把強保留的雜質洗脫下來,一針哪怕采集再久,也會有未知雜質干擾后面進樣的效果,這種情況下,可以增加梯度洗脫,使強保留成分在梯度上洗脫出來的方式來解決。

示例:


由上面三張圖可見,此中藥,在采用等度洗脫時,因有強保留未知雜質,連續進樣,會在后面的進樣出峰,干擾檢測。在待測成分出峰后,增加梯度,提高有機相比例,強保留物質在當針就洗脫下來,連續進樣確認,效果能wan全重現,后面進樣不會出現未知干擾峰影響


#02

用等度洗脫無法達到分離的情況

有些物質,特別是結構相近的物質,等度條件下無法達到分離,而采用梯度模式,因組分在有機相變化的選擇性差異,可以達到分離,這種情況下就需要采用梯度條件進行測試。

示例:



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