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不可不知,反相流動相該如何選擇

更新時間:2023-03-22 點擊次數(shù):1383

在HPLC中,流動相是純?nèi)軇┗蛘呋旌先軇┮约皫в泄腆w改性劑的溶劑。色譜工作者可以針對HPLC的不同應(yīng)用在數(shù)百種溶劑中進行選擇。溶劑的選擇要考慮諸多因素,如溶劑的粘度、折射率、腐蝕性、透明度等,還有商業(yè)價格。流動相的溶劑強度或有機溶劑百分比可控制分析物的保留時間。

1、什么是流動相

流動相是使分析物通過色譜柱的溶劑。分析物存在于適當(dāng)?shù)娜軇┲校跇悠分苽浜笞⑷肷V柱系統(tǒng)。該溶劑不被視為新基質(zhì),因為它不會干擾分析。可以在樣品制備過程中選擇分析物的載體的性質(zhì),以滿足特定要求,例如揮發(fā)性和與HPLC中流動相的混溶性。在反相色譜柱中,流動相比固定相更具極性。一般來說極性流動相是shou選,因為分離效果表現(xiàn)出更好的重現(xiàn)性。

分析物在流動相中的溶解度在色譜柱中也起著重要作用。對于溶于水或部分水性溶劑的化合物,選擇反相HPLC不是問題,但對于不溶于極性溶劑的化合物,通常需要使用正相色譜柱。樣品極性,固定相極性和流動相極性的評估對于色譜柱的選擇也很重要。

2、流動相的一般選擇要求

純度

所有溶劑都應(yīng)該具有最高的純度和質(zhì)量。HPLC級溶劑經(jīng)過預(yù)過濾和純化,在紫外線下具有最小的吸光度。因此,他們不含會在色譜圖基線中產(chǎn)生假峰的雜質(zhì)。緩沖液制備中使用的水具有最高純度。去離子水通常含有痕量有機化合物,因此不推薦用于HPLC。

粘度

為了保持可接受的壓降(<2500psi)和合理的流過HPLC色譜柱的流速,流動相粘度應(yīng)盡可能低。較低粘度的流動相產(chǎn)生狹窄的色譜峰。例如乙腈通常是反相HPLC的shou選溶劑,因為它不僅粘度低于甲醇或異丙醇,而且具有良好的保留特性。

沸點

如果涉及樣品回收,沸點很重要,低沸點溶劑更容易從樣品中去除。

無腐蝕性

溶劑必須對HPLC系統(tǒng)組件無腐蝕性。

混溶性

并非所有HPLC溶劑都可混溶。如果混合了不能混合的溶劑可能會導(dǎo)致一些問題,例如不穩(wěn)定的基線,波動的壓力等。異丙醇可與大多數(shù)常見的HPLC溶劑混溶。因此,在不確定最后使用的溶劑系統(tǒng)的情況下,它可以用來沖洗HPLC的流路

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